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CUSTOM SERVICE
| 問(wèn)題 | 原因 | 解決方案 |
| 條帶形狀不好看 | 膠凝的不均勻，聚合不好 | 灌膠前將溶液充分混勻 |
| 上樣齒扭曲使上樣孔大小不一 | 上樣前用針頭將齒撥正，注意不要將針頭插入膠內(nèi) | |
| 某些樣品鹽濃度較高 | 除鹽或?qū)悠符}濃度調(diào)成一致 | |
| 每孔上樣量不一致 | 調(diào)整上樣量使基本一致 | |
| 緩沖液陳舊，成分改變 | 重配 | |
| 凝膠下面有氣泡 | 電泳前先將氣泡趕走 | |
| 電泳時(shí)溫度過(guò)高 | 降低電流或電壓 | |
| 目的蛋白信號(hào)弱 | 樣品上樣量不足或目的蛋白濃度過(guò)低 | 加大上樣量或濃縮樣品 |
| 轉(zhuǎn)膜效率低 | 以下單列 | |
| 抗體濃度低 | 增加抗體濃度或延長(zhǎng)孵育時(shí)間 | |
| 顯色劑底物濃度不足 | 增加顯色劑用量 | |
| 顯色劑失效 | 更換顯色劑（吸取A、B液的槍頭不可混用） | |
| 顯色或曝光時(shí)間不足 | 延長(zhǎng)顯色或曝光時(shí)間 | |
| 轉(zhuǎn)膜效率低 | 轉(zhuǎn)膜緩沖液pH值與目的蛋白等電點(diǎn)相近 | 提高轉(zhuǎn)膜緩沖液pH值 |
| 凝膠與膜之間存在氣泡 | 轉(zhuǎn)膜前要排盡氣泡 | |
| 凝膠與轉(zhuǎn)印膜兩側(cè)濾紙大面積接觸 | 濾紙、轉(zhuǎn)印膜和凝膠大小要基本一致，避免濾紙直接接觸 | |
| 轉(zhuǎn)印膜種類選擇不當(dāng) | 使用質(zhì)量可靠的PVDF膜或硝酸纖維素膜 | |
| 電壓或電流過(guò)小 | 濕轉(zhuǎn)時(shí)20mA恒流，半干轉(zhuǎn)時(shí)25V左右恒壓 | |
| 轉(zhuǎn)印時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，蛋白還在凝膠中或穿透轉(zhuǎn)印膜 | 先電泳，根據(jù)蛋白大小及轉(zhuǎn)印裝置選擇合適的轉(zhuǎn)印時(shí)間 | |
| 濕轉(zhuǎn)過(guò)程中環(huán)境溫度過(guò)高 | 使用預(yù)冷的轉(zhuǎn)膜緩沖液或?qū)⒀b置至于4度 | |
| 顯色或曝光后無(wú)條帶 | 膠與膜方向反了 | 轉(zhuǎn)膜時(shí)應(yīng)依次放好PDVF膜與凝膠所對(duì)應(yīng)的電極,即凝膠對(duì)應(yīng) 負(fù)極,PDVF膜對(duì)應(yīng)正極。 |
| 選用的一抗、二抗及顯色方法不合適 | 選擇合適的一抗、二抗和顯色方法 | |
| 目的蛋白含量低于檢測(cè)下限 | 加大上樣量或濃縮樣品 | |
| 抗體效價(jià)過(guò)低 | 增加抗體濃度 | |
| 抗體孵育時(shí)間不足 | 延長(zhǎng)孵育時(shí)間，37°C孵育1小時(shí)以上 | |
| 抗體過(guò)度洗滌 | 減少洗滌時(shí)間及次數(shù) | |
| 加入HRP底物反應(yīng)與曝光檢測(cè)之間間隔時(shí)間過(guò)長(zhǎng) | 反應(yīng)3到5分鐘及時(shí)檢測(cè) | |
| 背景過(guò)高 | 封閉物用量不足 | 提高封閉物濃度，孵育時(shí)保證封閉液完全浸沒(méi)轉(zhuǎn)印膜 |
| 封閉物使用不當(dāng) | 檢測(cè)生物素標(biāo)記的蛋白時(shí)不可用脫脂奶粉封閉 | |
| 封閉時(shí)間不夠 | 室溫37度封閉1小時(shí)以上，4度封閉過(guò)夜 | |
| 抗體非特異性結(jié)合 | 降低抗體濃度，減少孵育時(shí)間 | |
| 抗體濃度過(guò)高或洗滌不夠 | 降低抗體濃度，增加洗滌次數(shù)和時(shí)間 | |
| 化學(xué)顯色底物過(guò)多 | 按說(shuō)明書加入適量的顯色底物 | |
| 雜帶多 | 雜蛋白多 | 處理目的蛋白 |
| 抗體特異性不強(qiáng) | 使用特異性強(qiáng)的抗體 | |
| 抗體孵育時(shí)間過(guò)久 | 減少抗體孵育時(shí)間 | |
| 二抗與抗原有交叉反應(yīng) | 選擇合適的封閉物 | |
| 底物顯色與曝光時(shí)間長(zhǎng)了 | 縮短顯色及曝光的時(shí)間 | |
| 大分子量WB | 膜孔徑太小 | 更換孔徑較大的膜 |
| 轉(zhuǎn)膜電壓電流低 | 提高電壓/電流 | |
| 轉(zhuǎn)膜時(shí)間短 | 延長(zhǎng)轉(zhuǎn)膜時(shí)間 | |
| 膠濃度太大 | 使用低濃度的膠 | |
| 轉(zhuǎn)膜緩沖液配方不合適 | 調(diào)整轉(zhuǎn)膜緩沖液中甲醇及SDS濃度 |
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